高溫滅菌是指用熱能殺死微生物，其原理是高溫使原生質中的蛋白質變性、使酶失活，致使微生物死亡。高溫滅菌主要有高壓蒸汽滅菌法、干熱滅菌法和灼燒滅菌法幾種。如果操作不當，即達不到預期的滅菌效果，現就常見錯誤分析如下。

  1.高壓蒸汽滅菌

  蒸汽滅菌屬濕熱滅菌，由于濕熱滅菌有潛能存在，被滅菌物體的溫度比蒸汽的低，蒸汽在其表面凝結成水，放出潛能，可迅速提高被滅菌物體的溫度。又由于水和水蒸汽比空氣的熱容量大、導熱快、穿透力強，所以，與干熱滅菌相比，滅菌需要的溫度低、時間短。由于高壓蒸汽滅菌法水蒸汽的溫度隨其所受壓力的增加而升高，因而滅菌用的高溫蒸汽都是通過加壓獲得的。

  手提式高壓滅菌鍋操作中常見的錯誤有：

  (1)排氣不徹底。在升壓前應將鍋內冷空氣排凈，因空氣是熱不良導體，若不排凈，冷空氣就會聚集井滯留在滅菌鍋中消毒筒的中下部，圍繞在待滅菌物的周圍。在這種情況下，假若鍋內僅排除一半空氣，當壓力表指針達到105Pa時，鍋內實際溫度僅能達到112℃，比要求的121℃低9℃之多，將導致滅菌不徹底，可能造成大面積染菌。(自動的高壓滅菌鍋，上下排氣閥，都要打開，然后加熱，排空氣)

  (2)排氣軟管沒有按要求插入滅菌筒的下部，或排氣軟管斷裂、缺失。滅菌鍋內的冷空氣是通過排氣軟管排出的，上述情況將造成滅菌筒外的蒸汽直接經排氣閥排出鍋外，滅菌鍋內的空氣排放受阻。

  (3)消毒筒內物品堆積太緊、太滿，阻礙蒸汽的流通和熱交換，使容器內升溫減慢，造成物體內部殺菌不完全。

  (4)升溫過快。滅菌的時間是以達到要求溫度后的持續時間計算的，但溫度的升降過程同樣起到殺菌的作用，升降溫度過快會通過影響總的積溫而影響滅菌效果。另外，升溫過快，特別是使用外源蒸汽的情況下，會造成被滅菌物體內部升溫滯后于壓力表指示溫度。

  (5)滅菌的物體體積(容量)過大。組織培養中或常規微生物實驗中，高溫蒸汽滅菌通常要在121℃(即蒸汽壓力為1kg/cm2或15磅/寸2，或0.105MPa)下保溫15min。這一規定僅適用于試管、三角瓶中小于200ml容量的。若體積太大，特別是固體培養基，會造成滅菌不徹底，應適當延長滅菌時間。

  (6)任意延長滅菌時間。規定的滅菌溫度和時間是經過科學試驗確定的，只要按照正確的滅菌程序是能達到滅菌目的的。但在實踐中常有人為了“保證徹底滅菌”而任意延長滅菌時間。這樣忽視了殺菌過程中溫度對培養基成分的破壞作用，是得不償失的。

  (7)溫度不穩定。滅菌過程中溫度(壓力)忽高忽低，特別是手提式電能滅菌鍋，它沒有控溫裝置，難于控溫。操作者可配置調壓變壓器，通過調節電壓控溫。此外，還常遇到滅菌鍋內加水太少(應加2～3L);容器內裝的溶液量過多(應少于2/3);安全閥失靈等問題。

  2.干熱滅菌

  干熱滅菌指在烘箱160℃溫度下，維持2h，消除物體上的微生物的方法。常見錯誤有：

  (1)將滅菌物品(如培養皿)堆摞放置，且堆得過滿、過擠，阻礙空氣流通和熱量的傳遞、交換;

  (2)升溫時不打開箱頂通風孔，影響箱內冷空氣及水汽的排除;

  (3)高溫(80℃以上)下開箱取物，熱蒸汽噴出造成燒傷及突然降溫，使玻璃器皿破裂;

  (4)溫度過高(180℃以上)造成包裝紙、棉塞焦化，失去防菌或過濾作用;

  (5)將不耐熱的槍頭、離心管、試管帽、濾器等塑料制品放入烤箱內滅菌，而致熔化。

  3.灼燒滅菌

  即直接利用火焰將微生物灼燒致死。特點：簡便、迅速、徹底。主要用于接種工具及器皿的滅菌。如接種杯、鑷子、剪刀、玻棒、瓶口及其封口用的鋁箔的滅菌常見的錯誤有：

  (1)接種工具的滅菌范圍不夠，如長度不夠，灼燒時沒有旋轉造成內外側滅菌不勻;

  (2)接種工具沒有降至常溫即用于接種;

  (3)對玻璃器皿灼燒過度，使棉塞、封口膜焦化或熔化